SDS-PAGE原理
其中SDS（十二烷基硫酸钠）是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白-SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。之所以会有分离胶和浓缩胶之分，浓缩胶和分离胶的PH值不同，前者主要表现为浓缩效用，后者表现为分子筛效用。浓缩胶的pH是6.8，在这个pH条件下，缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离，Gly的等电点为6.0，仅少数解离为负离子，在电场中移动速度很慢。酸性蛋白质在此pH下解离为负离子，三类离子的迁移速率为Cl>一般蛋白质>Gly，电泳开始后，Cl离子泳动快，在其后留下一个低离子浓度区。Gly在电场中移动很慢，造成移动离子的缺乏，于是快慢离子间就形成了一个缺少离子的高压区，在高压区内所有的负离子都会加速移动，当移到Cl离子区域时，高电压消失，蛋白质的移动速度慢下来，当以上稳定状态建立后，蛋白质样品在快慢离子间被浓缩形成一个狭小的之间层，按照电荷大小排列，但是由于目标蛋白都带有负电荷，所以位于同一的起点。从浓缩胶进入分离胶后，胶的pH升高，Gly的离解度增大，泳动率上升，又因为它分子小，故超过所有的蛋白质分子，紧跟在Cl离子后，Cl离子迁移后，低离子浓度不再存在，形成了恒定的电场强度，因此，蛋白质样品在分离胶中的分离主要取决于它的电荷性质，分子大小和形状，分离胶的孔径有一定大小，对不同相对质量的蛋白质来说，通过时收到的滞阻作用不同，即使静电荷相等的颗粒，也会由于这种分子筛的效应，把不同大小的蛋白质相互分开。
步骤：
1.配胶，有分离胶和浓缩胶之分，胶浓度随你蛋白的大小变化而变化，一般12%，一般需要两个小时，需要提前准备。短期可以充水放置于4℃冰箱。
2.将蛋白加入5X的SDS-loading， 100℃加热10min，以充分变性蛋白。
3.上样，一般10μL。
4.浓缩胶一般80V 30min 进入分离胶后可140V 30min。
5.结束后可用于考染或者western blot。
最后的最后 提醒一下自己：
丙烯酰胺-甲叉丙烯酰胺（Arc-Bis）：中等毒性，神经毒剂。低浓度接触数月数年后，渐出现头痛头晕疲劳，嗜睡，手指剌痛，麻木感，常伴有两手掌发红，脱屑，手掌足心多汗。
过硫酸铵（APS）：对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性.吸入后引起鼻炎、喉炎、气短和咳嗽等.眼、皮肤接触可引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤.口服引起腹痛、恶心和呕吐.长期皮肤接触可引起变应性皮炎.。
SDS：对粘膜和上呼吸道有刺激作用,对眼和皮肤有刺激作用.可引起呼吸系统过敏性反应。
TEMED：强神经毒剂
记得带上手套和口罩！
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去美国留学要带什么东西呢?
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雨湖区15322232854： SDS - PAGE测定蛋白质亚基分子量的原理是什么? - ？
毋晶茵栀：[答案] 1) 蛋白质跑SDS-PAGE前要用蛋白处理液处理(沸水浴5分钟),其中含有SDS,beta-巯基乙醇使蛋白质四级结构破坏(如果有的话),呈游离亚基状态. 2)SDS-PAGE的原理就是仅仅根据蛋白质的分子量是蛋白质在电厂中移动,进而被分离. 3)再...
雨湖区15322232854： 请问能否用最通俗的话去解释SDS凝胶电泳的原理? - ？
毋晶茵栀： 最大的不同是 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)用的蛋白质不做任何变性处理 SDS-PAGE中的SDS是十二烷基磺酸钠,是蛋白质变性剂,SDS能拆散蛋白质的折叠结构,然后沿伸展的多肽链的表面吸附.使肽链带净负电荷,蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关.
雨湖区15322232854： SDS - PAGE测定蛋白质的基本原理是什么?简述它的主要步骤? - ？
毋晶茵栀：[答案] 你必须先了解PAGE,它能有效地把不同类型的蛋白质分开的主要依据,是样品中各种物质的电荷和分子量的差异性.很长的原理.这里就当你了解了.SDS即十二烷基硫酸钠,是阴离子表面活性剂,它能以一定的比例和蛋白质结合,形成...
雨湖区15322232854： SDS - PAGE - 搜狗百科？
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雨湖区15322232854： 凝胶成像锌染色原理 ？
毋晶茵栀： 1、凝胶电泳:首先,待分析的蛋白质样品经过SDS-PAGE凝胶电泳分离.SDS-PAGE通过在蛋白质样品中加入类似于十六烷基硫酸钠(SDS)的表面活性剂,使蛋白质带有负电荷,并通过电场作用分离成不同大小的带状物.2、转移:凝胶电泳完成后,蛋白质通过电泳转移到含有锌离子的转移缓冲液中,这个步骤称为电泳转移.3、锌染色:在转移缓冲液中加入适量的亚硫酸和硫代硫酸钠,这两种试剂会与锌离子形成由蛋白质分子铁氰化合物组成的沉淀,这称为锌染色.这个沉淀表现为紫蓝色.4、可视化:经锌染色处理后,可以直接观察到电泳凝胶上的蛋白质带状区域(通常出现紫蓝色的带状区域),这些区域对应着各个分子量的蛋白质.
