固体培养基的制备
固体培养基的制备:
1、称取
用精确度1/100的电子天平称取培养基所需药品。先根据配方计算出配置一定量培养基所需的各种成分药品的量,然后用天平准确称取。称量时用称量纸折叠成簸箕状盛放药品。称量纸的折叠方法。
2、溶化
培养基放入烧杯或瓷缸中,慢慢加入少量所需水,边加入边用玻璃棒搅拌。如果培养基中不含有琼脂,培养基不需要加热;如果含有琼脂,则需要用本生灯或电磁炉加热煮沸,完全溶解后,再补齐所需水,并搅拌均匀。如果配置的培养基量很大,可用不锈钢锅加热溶化,可先用温水加热并随时搅动,防止焦化,如有焦化现象,配制的培养基就不能使用,要重新配制。
配制培养基时不可用铜或铁的容器溶化,因铜或铁制容器可能会使培养基中的铜和铁的含量超标,影响实验(培养基中铜含量大于0.3mg/L,细菌不宜生长,铁含量超过0.14mg/L,妨碍细菌产毒素)。对容易发生反应,产生沉淀的药品,要分开溶解,最后加入培养基,如磷酸二氢钾和硫酸镁。
3、调pH
虽然培养基中含有缓冲物质成分,能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内,但是配出的培养基若不符合要求,就要进行必要的调整。如果有已校准pH计,可用pH计。
如果没有,可用精密的pH试纸,再根据需要用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸(微调可用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸)调制所需的pH。
培养基的pH一般为7.4~7.6,也有酸性或碱性的。用氢氧化钠调整的需要高压灭菌的培养基,在调整pH时要调至高出所需0.1个~0.2个单位,因用氢氧化钠提哦啊正时,高压灭菌后,培养基大的pH要降低0.1~0.2。如培养基中含有碳酸钙成分,可不调pH。
4、过滤
配成的培养基,若无特殊要求,可省略此步。若有沉淀或浑浊,需要澄清的,液体培养基可用滤纸过滤。而固体培养基可用中间夹一薄层脱脂棉的双层纱布过滤。
如果过滤法还不能达到澄清的要求,则可用蛋清澄清法,即培养基加热冷却到50℃~60℃,装入三角瓶内(不超过容量的二分之一),按1000ml加入1个~2个鸡蛋的蛋清,用力摇晃3min~5min,高压蒸汽灭菌121℃、20min,取出趁热过滤即可。
5、分装
配制好的培养基根据不同的用途分装在三角瓶、试管等容器中,分装试管,如果试管量很大,可用自动分液器。
如果试管量少,可用漏斗分装。分装量不超过容器容积的三分之二。三角瓶以不超过容积的二分之一为宜;琼脂斜面以不超过试管长度的五分之一为宜,灭菌后,摆成的斜面为培养基的三分之一、底层为三分之二的量为宜;半固体琼脂分装量为试管长度的的三分之一。
用来接种或保菌的高层琼脂,分装量为试管长度的四分之一或三分之一,用来接种厌氧菌的要达到三分之二;琼脂平板,内径90mm的以13ml~15ml为宜,内径70mm的平板为8ml~10ml,制成的琼脂平板。
若表面水分较多,可将平板倒扣,放置在37℃培养箱内30min,干燥后再用。每批培养基另外分装一小玻璃瓶(约20ml)与该批培养基同时灭菌,为测定该批培养基最终pH。
6、灭菌
分装好的培养基应立即进行灭菌。
7、倒平板
灭菌溶化的培养基冷却到50℃左右后,倒入无菌干燥的培养皿中。培养基的温度不能过高,否则容易在培养皿的内盖上形成太多的冷凝水;温度太低,培养基又容易凝固成块,无法制成平板。
倒平板时,应在靠近酒精灯火焰进行,以免外界的杂菌落入平板内,左手拿培养皿,右手拿三角瓶的底部,用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下,灼烧瓶口,用大拇指和食指把培养皿盖打开一条缝,至瓶口刚好伸入,倒入培养基,以铺满底为限,不超过培养皿高度的三分之一,迅速盖好盖,放在桌面上,轻轻地转动培养皿,使培养基分布均匀,冷凝后即可。
8、摆斜面
装在试管中的琼脂培养基,在灭菌完成后,趁热立即摆放在木棒(或玻璃棒)上,并完成适时地斜度,冷却后,琼脂凝固即成斜面。斜面长度不要超过试管的二分之一。
9、质量检查
培养基灭菌后应仔细检查一遍,发现有破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染,都要丢弃,不能再用。并测定其最终pH。
还需要进行无菌检查和效果检查。无菌检查是将灭菌后的培养基取1管(瓶)~2管(瓶),37℃恒温培养1d~2d,确定无杂菌生长;效果检查是用标准菌种接种在相关的培养基上检查菌的生长、形态及生化情况,与已知情况相符。两种情况都合格,配制的培养基方可使用。
培养基的制备
培养基的制备如下:1、配料:在容器中加入少量水,按照配方称取各种药品,加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。2、溶解:淀粉溶解:少量冷水调成糊状,加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃ ,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。3、调PH:用1N的盐酸或1N...
配制培养基应注意哪些问题
琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤.亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤.新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去,再用滤纸反复过滤.如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法.即将冷却至55~60°C的培养基放入大的三角烧瓶内,装入量不得超过烧瓶容量的1\/2,每1000ml培...
制作培养基的步骤是什么?
1、配制溶液向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。
培养基的制备
培养基制备的基本过程:配料、溶化、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、检定、保存。相关内容如下:1、定义和分类:培养基是一种人工配制的、适合特定微生物或细胞生长繁殖的营养物质。根据其用途,培养基可以分为微生物培养基、植物培养基和动物培养基。根据其物理状态,培养基又可以分为固体培养基、半固体...
培养基的配制
1、称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。2、加热溶解 把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防...
培养基配置的步骤是什么?
三、基础培养基的制备 (一)牛肉浸液(肉水)1.成分 新鲜牛肉 500g ,水1000 ml。2.制法 (1)取新鲜牛肉,剔除肌膜、脂肪,切成小块,用绞肉机绞碎。(2)按上述比例加水,浸泡过夜(夏天应将浸泡液放置在低温的地方,防止腐败;如果没有冷藏条件时,可省去浸泡过夜这一步),其间应搅拌数次...
培养基制备有几个主要步骤
培养基制备的四个主要步骤:1、计算:根据培养基配方的比例,计算各种成分的用量;2、称量:准确称取各种成分;3、溶化:将各种成分加入烧杯,加热,用玻璃棒搅拌溶解,加入琼脂使其熔化后,补加水至一定量;4、调节PH值。
培养基配制
为了使食用菌能正常生长发育,培养基除了必须有足够的碳、氮营养外,还应注意碳与氮的比例(碳氮比,C\/N)。这样既能保证营养生长阶段对营养的需要,也能保证生殖生长的顺利进行。例如,巴西蘑菇培养料适宜的碳氮比(C\/N)为28~30∶1,含氮量1.4%~1.6%,投料量30~35千克\/米2。我们可以按照...
选择培养基有哪些制备方法
选择培养基的制备方法主要包括以下几种:一、制备基础培养基 首先,需要根据目标微生物的营养需求,选择适当的基础培养基成分,如蛋白质、碳水化合物、无机盐等。这些成分需按照一定比例混合,并进行必要的灭菌处理,以确保微生物的纯培养。二、添加选择性成分 为了选择特定的微生物,需要在基础培养基中添加...
配置培养基的原则有哪些
3、控制pH条件:培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。4、控制氧化还原电位:不同类型微生物生长对氧化...
霍腾罗尼:[答案] 1 加热,将琼脂融化2 如果是要做试管,就加分装3ml培养基到试管,塞上试管塞,如果是做平板,就将培养基倒入锥形瓶中3 按照培养基规定的灭菌方式灭菌4 如果是斜面,则将灭菌后的试管放成一个梯度,是培养基形成一个斜面,如...
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: MS固体培养基的制作流程 - ?
霍腾罗尼:[答案] 一、实验所需的仪器设备和用具. 二、实验安排与要求:将全班若干小组(6-7人),每小组配制500 mlMS固体培养基, 三、边示范边讲解实验方法和步骤 1、计算并填写培养基成分单 计算公式:∨母液=∨配制÷母液倍数 ∨激素=∨配制*培养基中所...
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: 如何配制400ml固体lb培养基 - ?
霍腾罗尼:[答案] 配制每升培养基,应该在950 ml去液态LB培养基离子水中加入:胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min. LB固体培养基1L和液体一样,加15g琼脂...
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: 配制培养基有哪些步骤 - ?
霍腾罗尼:[答案] 培养基的配制步骤大方向一般有四步:选择原料.培养基不同成分的选择,称量,处理(比如琼脂要剪碎,土豆要切块等)处理原料.如果是固体培养基需要煮培养基,加入不同成分煮沸,分装试剂,液体培养基则溶解装入锥形瓶或者试管.灭菌处...
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: 固体斜面培养基配制步骤和注意事项有哪些 - ?
霍腾罗尼:[答案] 1、培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别.因此,除所用的是标准方法,应严格按其规定进行配制外,一般均应尽量收集有关资料,加以比较核对,再依据自己的使用目的,加以选用,记录其来源. 2、培养基的制备...
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的基本步骤一般是() - ?
霍腾罗尼:[选项] A. 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 B. 称量→计算→溶化→灭菌→倒平板 C. 计算→称量→溶化→倒平板→灭菌 D. 称量→计算→溶化→灭菌→溶化→倒平板
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: 肠球菌固体培养基配制成分及方法 - ?
霍腾罗尼:[答案] 肠球菌固体培养基可以参考SN/T1933.1-2007食品和水中肠球菌检验方法中的KF琼脂、肠球菌琼脂,具体配置方法见标准内容即可. 不过,如果您只是想在固体培养基上培养出肠球菌,那使用一般的较高营养成分的培养基都是可以的,比如血琼脂、...
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: 怎样配制培养基啊? - ?
霍腾罗尼:[答案] 培养基有很多种,你要配制哪一种呢? 你要查清楚,你要配的培养基的成分有那些,然后把要用的东西找到.在配制之前你要把装培养基的容器准备好,是用试管、平皿还是三角瓶.之后看要配的是固体培养基还是液体培养基,觉得是否放琼脂或明胶....
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是() - ?
霍腾罗尼:[选项] A. 计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B. 计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 C. 计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D. 计算、称量、灭菌、溶化、倒平板
莫力达瓦达斡尔族自治旗19867335568: I.培养基的配制与培养是微生物实验中的一个重要环节.(1)图1所示的是制备固体培养基时的实验操作步骤之一,一般称为___.配制培养基时各种成分在熔化... - ?
霍腾罗尼:[答案] (1)图1所示的是制备固体培养基时的实验操作步骤之一,一般称为倒平板.配制培养基时各种成分在熔化后分装前必须进行调pH,培养基在接种前要进行高温高压灭菌,灭菌是否彻底或是否被污染需要检测,方法是未接种的培...