纯化pcr产物时，加入的磁珠要翻倍么

为什么加入磁珠的量不同，筛选片段不同~

一氪生物磁珠法核酸纯化试剂
1纯化反应干扰物
干扰物有高浓度蛋白、BSA，这两种物质会导致磁珠聚沉，从而影响纯化效率，需要添加SDS处理后进行纯化。
2片段选择性能准确性干扰物
干扰物有yichun，异Bing醇，聚乙er醇，会影响片段选择回收效果，需要上调或下调磁珠使用量。
3回收片段大小限制：
大小范围为100bp-20kb，超范围片段回收效率将显著降低。
4应用范围限制：
仅用于常规分子生物学反应溶液中的DNA的纯化，磁珠不含裂解细胞及蛋白成分，不可用于组织、细胞、血浆等生物样本的DNA提取。
5原有过膜纯化方法更换为磁珠纯化方法可能带来的预期外影响
磁珠法纯化不同于过膜法纯化的原理，在替换的过程中可能预见的问题主要有：
1)磁珠法纯化中，纯化产物会存在痕量的反应液残留。
2)纯化片段大小可能发生变化
评价检测方法：
1)杂质残留影响，建议进行试用评估及测试，检测最终结果。
一般的二代测序文库构建过程中，末端修复、3‘端加A、及接头连接反应中应用磁珠法纯化，痕量残留不会对后续反应造成影响。
2)有特殊片段大小需求的情况下，可根据目标片段大小选择适宜的纯化磁珠用量。

不可以。
首先，采用的是质粒模板；
其次，扩增得到的非单一条带，如果不纯化直接酶切，那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段，继续试验的话，菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。

第三、PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液，会极大的影响酶切的效率。甚至于根本就切不开，即便是隔夜酶切也不可以。

使用厂家同同面氪物技术核酸纯化试剂使用及注意事项供参考： 步骤：使用水乙醇与纯化水配制70%乙醇备用 步骤二：2-8℃冰箱取磁珠悬浮液室温条件震荡混匀平衡30min 步骤三：充震荡混匀平衡磁珠加入待纯化酶反应或PCR反应产物溶液磁珠加入体积别参考图1图2若待纯化产物体积足用纯化水或10mM Tris-HCl（pH8.0）补充至相应体积 步骤四：用移液器反复吹打10磁珠悬浮液PCR产物或者酶反应物充混匀室温条件静置5min 步骤五：反应板放置磁力架静置2min待溶液澄清清吸走转入废液桶内 步骤六：向反应板加入200μL新鲜配置70%乙醇室温静置30s静置结束乙醇吸走转入废液桶内操作环节反应板磁力离架拿或磁珠吹散 步骤七：重复步骤六 步骤八：保持反应板置于磁力架状态室温盖晾干2min除残存乙醇 步骤九：反应板磁力架取加入50μL洗脱液移液器反复吹打10混匀室温静置3min洗脱液加入量根据实际需要定应少于5μL 步骤十：反应板重新放置磁力架室温静置1min清液即纯化DNA产物 步骤十：清液转入新反应管或者反应板供步反应或检测使用

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洞口县15740293321： PCR产物纯化时 用的是什么纯化,扩增完直接纯,还是要跑胶? - ？
晏武迪汀： 那要看你的PCR产物有没有非特异性带,如果你PCR产物跑胶后很纯的只有一条带(不算引物二聚体),那么就不需要切胶纯化,传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清...

洞口县15740293321： 分离纯化核酸有哪些注意事项 - ？
晏武迪汀： 使用方法因厂家不同而不同,下面是一氪生物技术的核酸纯化试剂使用方法及注意事项,供参考: 步骤一:使用无水乙醇与纯化水配制70%乙醇备用. 步骤二:从2-8℃冰箱中取出磁珠悬浮液,在室温条件下震荡混匀,平衡30min. 步骤三:将...

洞口县15740293321： PCR产物的纯化方式有哪几种? - ？
晏武迪汀： 1.过柱纯化 2.乙醇/醋酸钠纯化 3.SAP-Exon I纯化 等 附上篇文献: http://wenku.baidu.com/view/370fbed326fff705cc170a2a.html

洞口县15740293321： 羟基磁珠主要应用于哪些方向? - ？
晏武迪汀： uiv chem羟基磁珠主要应用与 质粒提取,血液、组织、植物和微生物等样本中基因组DNA提取,细胞分选提取病毒DNA/RNA,总RNA以及免疫检测 纯化PCR产物.

洞口县15740293321： pcr产物纯化中,如何提高DNA的回收率 - ？
晏武迪汀： 你是指跑胶、割胶然后用试剂盒纯化回收吗?如果是的话,有以下几个方法可能可以提高回收率.1凝胶要充分溶解.2加elution buffer溶解DNA时少加点.3用elution buffer洗脱时可以把管子里的溶液吸回来,重复一次.4溶解时延长室温溶解时间.5PCR循环可以多几次. 6可以把两管回收离心后,合并成一管吸附柱回收.

洞口县15740293321： 如何春花pcr产物或粗提的dna - ？
晏武迪汀： DNA纯化的步骤是:向左转|向右转1.2-25倍100%的酒精冰箱中先预冷,降温后再加入DNA中;2.低温,冰中反应5min至更长时间;3.低温,离心;4.加70%乙醇清洗两遍;5.加TE溶解DNA.

洞口县15740293321： 羧基磁珠主要应用于哪些方向? - ？
晏武迪汀： uiv chem羧基磁珠主要应用亲和层析与纯化,免疫检测 ,细胞分选,特异性核酸分离,生物传感器,药物筛选和输送.

洞口县15740293321： 如何纯化PCR产物?为什么总是不纯 - ？
晏武迪汀： 你说的是PCR产物的纯化吧? 先用溶液溶解含DNA的琼脂糖凝胶,然后加入有吸附柱的离心管中 吸附柱吸附DNA 离心,将含琼脂糖的溶液去除; 接下来加入去盐的漂洗液进一步去除杂质;因PH值的原因,DNA还是吸附在吸附柱上的膜上; 最后加入纯水或者TE溶解液,在这个条件下DNA会溶解在其中,通过离心将液体离下来,得到的液体就是纯化好的PCR产物了

洞口县15740293321： PCR产物浓缩纯化的时候为什么要 - 20°冻半个小时 - ？
晏武迪汀： 你说的步骤应该是乙醇沉淀的步骤,在一步中,通过低温,乙醇,和高盐浓度可以帮助脱水,并使DNA从溶液中最大程度的析出,从而形成沉淀.这样通过离心后,就可以将溶解在溶液中的DNA与溶液进行分离.这个时候,再用适合体积的TE或水去溶解核酸,就可以减少溶液的体积,起到浓缩DNA的作用.

洞口县15740293321： pcr产物的t - vector克隆方法,应注意哪些操作环节 - ？
晏武迪汀： 1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A(一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min),然后和普通PCR产物一样进行TA克隆; 2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适(一般3-8:1)