免疫组化 一张片子多个样品可以同时染几个不同抗体吗
1、定义不同
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
2、作用不同
免疫组化：标本，实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。
抗体，免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体，单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
常用染色方法，根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。
原位杂交：细胞特异性mRNA转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；
感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测；
癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；
基因在染色体上的定位；
检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等；
分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。
3、意义不同
免疫组化：近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。
尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。
原位杂交：原位杂交：在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点，
应用带有标记的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质）DNA或RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的 mRNA或DNA 的存在并定位；
用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
参考资料：百度百科-原位杂交
参考资料：百度百科-免疫组化
能不能放要看你组织多大，只要能在一个载玻片上发下就可以放的，3.0ml的一抗够用了，我们常规做组化一抗只是覆盖组织表面而已，3.0ml的一抗够做好几十张切片了，你自己想想是不是，一张切片几ul就OK了呀。
免疫组化是利用抗原与抗体间的特异结合原理和特殊的标记技术，对组织和细胞内的特定抗原、抗体进行定位、定性、定量的一们技术。我们都是先进行免疫组化，在DAB染色后进行HE染色。既能看到免疫组化的结果，又能看到细胞的形态，CD34+免疫组化染色后是棕色的颗粒，效果很好。
1）做免疫组化的片子最好不要同时做HE染色，因为那样会掩盖阳性着色的结果；而且用苏木素复染细胞核也是淡染，若要在免疫组化的片子上观察形态学的改变，除非有非常典型的表现，一般是有很大的难度的。
2）你是培养的细胞做免疫组化吗？如果是的话，那就每个样本只有一张片子吧？唯一的办法是进行免疫双染，同时做CD34和AFP（甲胎蛋白）。我觉得后者阳性便可以或多或少的获得向肝细胞分化的证据。
3）用HE染色来识别造血干细胞向肝细胞分化，也就是说要看到肝细胞的典型形态学改变后才可以下结论。问题是：早期的肝细胞仅凭形细胞态学观察并不能很容易的被识别。病理大夫看组织切片，重要的是看其组织学结构，对肝细胞也是这样。如果单拿出来一个细胞，还是培养的细胞，染色后真的不容易区分。所以我觉得你设计的用HE染色来确定早期细胞向哪个方向分化不是很有说服力。
4）如果是切片，也就是说每个样本可以有多张切片，那可以在连续切片上分别染CD34和AFP，拍照时选择相同视野，也有一定说服力。但是还是不如双染法更可靠。
5）用双染最大的问题在于：这两者都表达在胞浆中，染色容易相互覆盖。所以在双染的方法选择上你还要再考虑一下，可不可以用免疫荧光双染？这样也很有说服力的
迪欧重组： 免疫组化是利用抗原与抗体间的特异结合原理和特殊的标记技术,对组织和细胞内的特定抗原、抗体进行定位、定性、定量的一们技术.我们都是先进行免疫组化,在DAB染色后进行HE染色.既能看到免疫组化的结果,又能看到细胞的形态,...
绥德县13450314607： 免疫组化一张病理片放3患者癌组织 做同一个抗体可以不?如果可以 3.0ml的一抗够用吗?？
迪欧重组： 能不能放要看你组织多大,只要能在一个载玻片上发下就可以放的,3.0ml的一抗够用了,我们常规做组化一抗只是覆盖组织表面而已,3.0ml的一抗够做好几十张切片了,你自己想想是不是,一张切片几ul就OK了呀.
绥德县13450314607： 免疫组化注意事项? - ？
迪欧重组： 1、 标本的固定组织标本及时的取材和固定是做好免疫组化染色的关键第一步,是有效防止组织自溶坏死,抗原丢失的开始.离体组织应尽快的进行取材固定,最好20分钟内,因为有些抗原若固定不及时可能就检测不到了.而对于固定液的选...
绥德县13450314607： 免疫组化的非特异性染色？
迪欧重组： 如果你的片子和操作过程都是一样,而一组没信号、另一组却有信号,那出现差异的原因就应该是一抗的反应过程(不知你的显色过程是怎样的);而你要是能确定看到的结果不是基因表达的实际情况,即你所说的非特异染色,那就应该是抗体的原因,单就非特异染色而言,可能是你的抗体稀释度不够,可以尝试倍增稀释比,最好是查询使用与你用相同抗体的相关文献的稀释比,或直接咨询公司的技术支持;另外一个原因可能是你的抗体不好使,由于你的另一组抗体没有提供阳性信号,致使你的体系没有可靠的对照,建议你选择一个阳性对照,比如肿瘤中常用的ki67,这样可以知道你的操作步骤是否存在问题.
绥德县13450314607： 免疫组化双染的问题 - ？
迪欧重组： 多重免疫酶标记染色 以酶催化不同底物呈现不同颜色产物标示同一切片内两种或两种以上抗原为理论基础所建立起来的多重免疫标记染色方法.在光镜下可以同时观察和对比,样品保存时间相对较长,一次曝光即可成像,故较双重免疫荧光染色...
绥德县13450314607： 一个组织可以做两种受体的免疫组化吗 - ？
迪欧重组： 可以啊,实验还不是随便你设计的,你设计的实验符合你想要的实验结果,你就可以操作
绥德县13450314607： 怎样切小鼠乳腺肿瘤组织免疫组化时能看到血管 - ？
迪欧重组： 1、提高你阅片的基本功,如不会看,去医院找病理科医师帮你看. 2、简单的方法:同一张切片上放2个组织,其中一个做F8因子染色,另一张做你要的项目,然后对照看即可找到血管. 3、复杂的方法:同一张切片上做不同标记的双相免疫组化染色.可以看见血管的同时看见肿瘤细胞.
绥德县13450314607： 免疫组化与ELISA哪个先进 - ？
迪欧重组： 没有那个更先进的说法吧.ELISA的话对于微定量分析非常有用,所用试剂和样品量很少,且结果精确(具体看实验设计的分组数),更重要的是这种方法可以一次性大量测量多个样本,比如做血清学诊断的话,一次可以做上百个样本,省时省力节约资金.免疫组化的话针对性比较强,而且一般是以组织或者细胞为样本,注意哦,酶免一般是使用血清或者组织磨碎液.免疫组化可以快速检测样本中抗体的阳性或者阴性,一般不用于定量检测.当然了,二者的最大不同就是酶免一般是将抗原或抗体结合到固相表面,而免疫组化一般是显色做吸光值分析.也有一些人把酶免归类入免疫组化,毕竟酶免的思路就是免疫组化的思路,不过酶免更适用于实验室的定量分析,二者都比较先进.谢谢!
绥德县13450314607： 免疫组化sp法和sabc法? - ？
迪欧重组： SP法是链霉菌抗生素蛋白——过氧化物酶连接法而SABC法也是一个生物素标记抗体显色方法二者最大的区别就是试剂盒不一样,主要是因为二抗的标记物不同,选择的时候,可以根据实验室现有的或者最容易购得二抗选择不同的试剂盒,主要是显色的机制上的不同.
