量规设计原则

作者&投稿:何毛 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
在教学过程中,量规的设计一般遵循哪些原则~


引物设计原则
1、长度:15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性。
2、G十C含量:应在40%一60%之间,PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时,其Tm恒等于4×(G十C)十2×(A十T)。
3、碱基分布的随机性:应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3’端出现超过3个的连续G或C,否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。
4、引物自身:不能含有自身互补序列,否则会形成发夹样二级结构。
5、引物之间:两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基,不然会形成引物二聚体,尤应避免3’端的互补重叠。
6、上下游引物的互补性:一个引物的3‘末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。
7、3’末端:如果可能的话,每个引物的3‘末端碱基应为G或C。
8、引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。

扩展资料
引物合成
1、是将预先连接在固相载体上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应,脱去其5′-羟基的保护基团DMT,获得游离的5′-羟基。
2、合成DNA的原料,亚磷酰胺保护核苷酸单体,与活化剂四氮唑混合,得到核苷亚磷酸活化中间体,它的3′端被活化,5′-羟基仍然被DMT保护,与溶液中游离的5′-羟基发生缩合反应。
3、带帽(capping)反应,缩合反应中可能有极少数5′-羟基没有参加反应(少于2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应,这种短片段可以在后续环节根据实验需要来选择纯化方式分离掉。
4、在氧化剂碘的作用下,亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。
参考资料来源:百度百科—引物设计

量规的设计原则是极限尺寸判断原则(泰勒原则)。符合该原则的量规型式为:
通规:其测量面应具有与孔或轴相应的完整表面(通常称为全形量规),其尺寸等于被检工件的最大实体尺寸,且长度等于配合长度,通规域工件的接触是面接触,它是控制工件的作用尺寸。
止规:其测量面应是点状的,两点测量面之间的尺寸等于被检工件的最小实体尺寸。止规与工件的接触系点接触,它是控制工件的局部实体尺寸。
以上是对通规和止规总的、原则性的要求,这样规定的理由是:
通规是限制孔和轴的作用尺寸的,所以其形状也应该体现作用尺寸中是内接的最大理想轴和外接的最小理想孔的概念,故应做成完整圆柱面,其尺寸等于工件最大实体尺寸,长度等于被检孔轴配合长度是因为作用尺寸是在配合全场上定义的。
止规是限制孔和轴的实际尺寸的、应排除被检孔轴的形状误差对检测的影响,故应检验局部实际尺寸,因此止规做成点状,其测量面与被测孔轴只作两点接触。


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羿霭小儿: 哩中人工大

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