关于革兰氏染色的问题,在线等
革兰氏阳性菌细胞壁特殊组份 细胞壁较厚,约20~80mm。细胞壁主要由肽聚糖和磷壁酸组成。肽聚糖含量丰富,有15~50层,每层厚度1nm,约占细胞壁干重的50~80%,而且质地致密,是具有高机械强度的三维空间结构。磷壁酸是革兰阳性菌的重要表面抗原。
革兰氏阴性菌细胞壁特殊组份 细胞壁肽聚糖含量少,约1~3层,占细胞壁干重的10%左右,且结构疏松,其中还有三层结构,由内到外依次为脂蛋白、外膜、脂多糖。
染色原理有多种解释:①革兰阳性菌细胞壁结构比革兰阴性菌致密,肽聚糖层厚,脂类含量低,乙醇不易透入,故菌体内结晶紫-碘复合物不易被乙醇脱色;②革兰阳性菌含有多量核糖酸镁盐,可与结晶紫和碘结合成大分子复合物,不易脱色;而革兰阴性菌中此种物质含量甚少,故易被乙醇脱色;③革兰阳性菌等电点(Ph2~3)比革兰阴性菌多,故于带阳电荷的结晶紫染料结合较为牢固,不易脱色。目前认为,在上述各因素中,以细胞壁结构上的差异为最重要。
革兰氏染色结果不同是由于革兰氏阴/阳性菌的细胞壁的成分和结构不同而造成的。若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应,关键是细胞壁的通透性的改变,使结晶紫染液可以脱色透出。造成假阴性现象。
至于步骤我就不知道哪一步能省略了。
2、由于油的折射率大于空气而接近玻璃,所以使用油镜可以增加分辨率
3、涂片时取菌量要适宜且要均匀涂抹,避免贪多造成菌体堆积而难以看清细胞个体形态。同时也应避免取菌量太少而难以在显微镜视野中找到细胞。必须等涂片干燥后加热固定,避免加热时间过长,否则细胞会破裂或变形。
我前两天刚做这个实验,从实验教材上给你找的,也算是让我复习了一遍,希望对你有用。
1革兰氏染色是根据细菌着色的不同来区分细菌的一种染色方法,蓝色为阳性,红色为阴性。
2过程中应该注意每种染料在玻片上停留的时间,还有就是染液最好是新配的啊。
草酸铵结晶紫(一分钟)--水洗--擦干--革兰氏碘液(1分钟)--水洗--擦干--酒精脱色(30秒)--水洗--擦干——沙黄复染(30秒)--水洗--擦干--镜检。
3当观察倍数大时(100倍)镜头和玻片接触时,镜头回回缩,用松柏油可能是为了保护镜头吧。
4掉取细菌涂片时,要先在玻片上滴少量生理盐水,不用太多啊,薄薄一层就行,再就是掉取细菌不宜过多,尽量涂抹均匀就好,大概直径1cm吧。用火焰固定时一定要等玻片完全干的时候在进行,温度大概是手背能承受的温度就好了,时间不宜过长。
个人经验,仅供参考,希望对你有帮助。
有什么疑问可以留言给我哦,我刚做完微生物方面的实验。呵呵
1 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难观察
阳性紫色阴性红色
。染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:
1)涂片固定。
2)草酸铵结晶紫染1分钟。
3)自来水冲洗。
4)加碘液覆盖涂面染3分钟。
5)水洗,用吸水纸吸去水分。
6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分。
7)蕃红梁色液(稀)染10秒钟后,自来水冲洗。干燥,镜检。
染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色。
2 油镜放大倍数大。
3 涂片时应选取浓度适合的菌液涂抹,并用火微烤固定。
gram染色分四步
第一步初染色
用结晶紫
第二部媒染
用碘染
碘会促进染料染色,
这时阳性菌会带上蓝色
第三步
褪色
用乙醇洗
第四步
逆染色
用番红
阳性菌不变色,阴性菌会带上番红色
2
空气折射率高,光会被折射到空气中,导致分辨率下降。观察倍率大时必须用折射率低的,于是用松节油填充物镜下面的空隙。
3
控制时间
太短会把样本洗掉,太长会变形。
革兰氏染色与显微镜检查法
进行革兰氏染色时,为什么特别强调菌龄不能太老,用老龄细菌染色会出现...
革兰氏染色原理根本在于G+和G-细胞壁差异,若菌龄太老,细胞壁通透性增大,或者菌体死亡、自溶,使得G+误染成G-,因为革兰氏染色最后一步是复染,用的番红或者沙黄染液,老菌或自然死菌定然被染成红色,这类菌即使最后再用紫色染液染色,也是会变成紫色。如果菌龄太老而造成菌体死亡或自溶常使革兰...
革兰氏染色的问题!!!
不必须在无菌实验室,在未消毒的屋子里可以做 菌体染色实验只有取菌种这一步需要小心,因为可能会污染了已经纯化的菌种。置于在染色时其他菌种的污染可以忽略,因为毕竟数量比起实验的菌来说太少了 实验过程中是否需要超净台,看你的菌种养在什么器皿里。如果是养在试管里的话,一个酒精灯足矣。如果是...
革兰氏染色法涂片要薄而均匀为什么
该问题原因如下:1、如果过于浓厚,菌体会很难吸附到载玻片上,染色冲洗过程中很容易别冲下来。2、表层被染色,但是内层菌体很难染色。3、显微镜观察时很难看清,重重叠叠的细胞,可想而知,肯定不如分散开的细胞容易观察。革兰氏染色法是一种鉴别细菌的染色法,这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学...
革兰氏染色是否成功应注意哪些问题
涂片的厚薄和脱色时间的掌握,是革兰染色成败的关键。
革兰氏染色法,涂片问题
取样时,要取到重要部位,涂片不能涂得太厚,只要把重要的在涂在玻片上就行了。革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师、细菌学家 Christain Gram创立。细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可...
2.革兰染色\/抗酸染色是否成功,有哪些问题需要注意?
染色时,乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。而抗酸染色只需要三个步骤。抗酸染色分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质,包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌一般不易着色,要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后,就很难被酸性脱色剂脱色,故名抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色...
革兰氏染色涂片为什么不能过于浓度?
问题一:染液过浓的话脱色时间需要较长。问题二:1.选用活跃生长期的菌种,否则造成假阴性;2.涂片不宜过厚,以免脱色不全造成假阳性;3.脱色是染色的关键,脱色不够造成假阳性,过度造成假阴性。完毕。
细菌的简单染色和观察实验中,有以下几个问题:
1、如果没有干燥,水油不相容,水泡沉在油底,松柏油与装片接触不完全,影响观察 2、具体不是很清楚,但是染色是为了便于观察和细菌的定性,比如说革兰氏染色法就可以从镜检的颜色来判断细菌的阴阳性。3、金葡球菌进革兰氏染色后在油镜下你便可以看到许多蓝色的球菌,有的呈散在游离态,有的呈若干...
学生在进行革兰氏染色时,出错的主要原因有哪些?
学生在进行格兰仕染色的时候出错的主要原因第一个就是染色的时间太短,第二个就是拖车的时间太长,这样的话就可以使染色不均匀。
革兰氏染色的意义
问题三:革兰氏染色的临床意义 其重要的临床意义在于:1.鉴别细菌 2.选择药物 3.与致病性有关:革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素;而内毒素主要是指革兰氏阴性菌胞壁成分中的脂多糖,两者的致病作用不同。问题四:革兰氏染色法在微生物学中有何重要意义 其重要的临床意义在于:...
一哲氯化:[答案] 1.选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性. 2.涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性. 3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性.
遂溪县18323595908: 关于革兰氏染色的问题,在线等 - ?
一哲氯化: 1革兰氏染色是根据细菌着色的不同来区分细菌的一种染色方法,蓝色为阳性,红色为阴性. 2过程中应该注意每种染料在玻片上停留的时间,还有就是染液最好是新配的啊. 草酸铵结晶紫(一分钟)--水洗--擦干--革兰氏碘液(1分钟)--水洗--...
遂溪县18323595908: 影响革兰氏染色正确性的因素有哪些 - ?
一哲氯化: 一、影响因素 1、在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果,假阳性主要是由于脱色不完全,可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度,导致脱色不完全. 2、假阴性可能是因为细胞固定过度,造成细胞壁通透性的改变,而出现假阴性结...
遂溪县18323595908: 革兰氏染色法的有关问题 - ?
一哲氯化: 1.分别找两种已知的G+和G-菌,用完全一致的手段对其操作染色,若镜检结果与已知事实相符,则此时可认为染色操作是正确的,结果是可靠的. 2.分离成单个菌体、在培养基中培养成菌斑,涂板、染色、显微镜就可以找到染色体非常清晰的染色菌体!3. 一般设置一个对照 即取一株生长健壮,且已知其革兰氏染色反应的菌株,与待检测的菌株一同染色,染色时间、染液量一致.染色后一同做镜鉴. 一般G+选枯草芽孢杆菌,G-取大肠杆菌 4.
遂溪县18323595908: 有关革兰氏染色法的相关问题.?
一哲氯化: 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌.此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应. 步骤...
遂溪县18323595908: 革兰染色的原理是什么? - ?
一哲氯化:[答案] 1.原理 革兰氏染色的原理尚未完全阐明.目前主要有细菌等电点\化学结构及细胞膜通透性等三种学说: (1)革兰氏阳性菌等电点在PH2~3,比阴性菌(PH4~5)为低.因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌强. (2)革兰氏阳性菌含有核糖核酸镁盐...
遂溪县18323595908: 革兰氏染色法的问题1、现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌,请你鉴定其革兰氏染色反应?你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株... - ?
一哲氯化:[答案] 我只会回答第二个: 菌龄太老的话,细胞壁通透性变差,阳性菌也会被染成红色. 第三个后半问: 乙醇脱色后,阳性细菌和阴性细菌都是蓝色.
遂溪县18323595908: 革兰氏染色法 - ?
一哲氯化: 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立 细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做...
遂溪县18323595908: 革兰氏染色的关键步骤是什么 - ?
一哲氯化:[答案] 革兰氏染色四大基本步骤: 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 沙黄复染 其中乙醇脱色是关键 因为如果脱色过度,有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性 如果脱色不够,有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性
遂溪县18323595908: 求几道关于革兰氏染色法的生物体答案,1.影响革兰氏染色结果正确性的因素有哪些?染色中最关键的环节是什么?2.革兰氏染色的菌龄为什么不能太老》用... - ?
一哲氯化:[答案] 1.影响因素太多了,菌龄、涂片厚薄均匀度、媒染时间、乙醇脱色程度等都是.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色.如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌.脱色...