关于革兰氏染色的问题,在线等

作者&投稿:戏心 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
关于革兰氏染色的问题~

革兰氏阳性菌细胞壁特殊组份 细胞壁较厚,约20~80mm。细胞壁主要由肽聚糖和磷壁酸组成。肽聚糖含量丰富,有15~50层,每层厚度1nm,约占细胞壁干重的50~80%,而且质地致密,是具有高机械强度的三维空间结构。磷壁酸是革兰阳性菌的重要表面抗原。
革兰氏阴性菌细胞壁特殊组份 细胞壁肽聚糖含量少,约1~3层,占细胞壁干重的10%左右,且结构疏松,其中还有三层结构,由内到外依次为脂蛋白、外膜、脂多糖。
染色原理有多种解释:①革兰阳性菌细胞壁结构比革兰阴性菌致密,肽聚糖层厚,脂类含量低,乙醇不易透入,故菌体内结晶紫-碘复合物不易被乙醇脱色;②革兰阳性菌含有多量核糖酸镁盐,可与结晶紫和碘结合成大分子复合物,不易脱色;而革兰阴性菌中此种物质含量甚少,故易被乙醇脱色;③革兰阳性菌等电点(Ph2~3)比革兰阴性菌多,故于带阳电荷的结晶紫染料结合较为牢固,不易脱色。目前认为,在上述各因素中,以细胞壁结构上的差异为最重要。

革兰氏染色结果不同是由于革兰氏阴/阳性菌的细胞壁的成分和结构不同而造成的。若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应,关键是细胞壁的通透性的改变,使结晶紫染液可以脱色透出。造成假阴性现象。

至于步骤我就不知道哪一步能省略了。

1、革兰氏染色是由丹麦医生名字命名,他发现某些细菌对特定的染料有很高的亲和力,据此可将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性,是由细菌细胞壁结构和组成的差异所决定的。本实验应注意:1、选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染色成红色而造成假阴性。2、涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。3、脱色是革兰氏染色成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性。
2、由于油的折射率大于空气而接近玻璃,所以使用油镜可以增加分辨率
3、涂片时取菌量要适宜且要均匀涂抹,避免贪多造成菌体堆积而难以看清细胞个体形态。同时也应避免取菌量太少而难以在显微镜视野中找到细胞。必须等涂片干燥后加热固定,避免加热时间过长,否则细胞会破裂或变形。

我前两天刚做这个实验,从实验教材上给你找的,也算是让我复习了一遍,希望对你有用。

1革兰氏染色是根据细菌着色的不同来区分细菌的一种染色方法,蓝色为阳性,红色为阴性。
2过程中应该注意每种染料在玻片上停留的时间,还有就是染液最好是新配的啊。
草酸铵结晶紫(一分钟)--水洗--擦干--革兰氏碘液(1分钟)--水洗--擦干--酒精脱色(30秒)--水洗--擦干——沙黄复染(30秒)--水洗--擦干--镜检。
3当观察倍数大时(100倍)镜头和玻片接触时,镜头回回缩,用松柏油可能是为了保护镜头吧。
4掉取细菌涂片时,要先在玻片上滴少量生理盐水,不用太多啊,薄薄一层就行,再就是掉取细菌不宜过多,尽量涂抹均匀就好,大概直径1cm吧。用火焰固定时一定要等玻片完全干的时候在进行,温度大概是手背能承受的温度就好了,时间不宜过长。

个人经验,仅供参考,希望对你有帮助。
有什么疑问可以留言给我哦,我刚做完微生物方面的实验。呵呵

1 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难观察
阳性紫色阴性红色
。染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定。

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是:
1)涂片固定。
2)草酸铵结晶紫染1分钟。
3)自来水冲洗。
4)加碘液覆盖涂面染3分钟。
5)水洗,用吸水纸吸去水分。
6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分。
7)蕃红梁色液(稀)染10秒钟后,自来水冲洗。干燥,镜检。
染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色。

2 油镜放大倍数大。

3 涂片时应选取浓度适合的菌液涂抹,并用火微烤固定。

gram染色分四步
第一步初染色
用结晶紫
第二部媒染
用碘染
碘会促进染料染色,
这时阳性菌会带上蓝色
第三步
褪色
用乙醇洗
第四步
逆染色
用番红
阳性菌不变色,阴性菌会带上番红色
2
空气折射率高,光会被折射到空气中,导致分辨率下降。观察倍率大时必须用折射率低的,于是用松节油填充物镜下面的空隙。
3
控制时间
太短会把样本洗掉,太长会变形。

革兰氏染色与显微镜检查法




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革兰氏染色涂片为什么不能过于浓度?
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细菌的简单染色和观察实验中,有以下几个问题:
1、如果没有干燥,水油不相容,水泡沉在油底,松柏油与装片接触不完全,影响观察 2、具体不是很清楚,但是染色是为了便于观察和细菌的定性,比如说革兰氏染色法就可以从镜检的颜色来判断细菌的阴阳性。3、金葡球菌进革兰氏染色后在油镜下你便可以看到许多蓝色的球菌,有的呈散在游离态,有的呈若干...

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遂溪县18323595908: 革兰氏染色需要注意哪些问题 为什么 -
一哲氯化:[答案] 1.选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性. 2.涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性. 3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性.

遂溪县18323595908: 关于革兰氏染色的问题,在线等 -
一哲氯化: 1革兰氏染色是根据细菌着色的不同来区分细菌的一种染色方法,蓝色为阳性,红色为阴性. 2过程中应该注意每种染料在玻片上停留的时间,还有就是染液最好是新配的啊. 草酸铵结晶紫(一分钟)--水洗--擦干--革兰氏碘液(1分钟)--水洗--...

遂溪县18323595908: 影响革兰氏染色正确性的因素有哪些 -
一哲氯化: 一、影响因素 1、在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果,假阳性主要是由于脱色不完全,可能是由于涂片过厚,或者是结晶紫染色过度,导致脱色不完全. 2、假阴性可能是因为细胞固定过度,造成细胞壁通透性的改变,而出现假阴性结...

遂溪县18323595908: 革兰氏染色法的有关问题 -
一哲氯化: 1.分别找两种已知的G+和G-菌,用完全一致的手段对其操作染色,若镜检结果与已知事实相符,则此时可认为染色操作是正确的,结果是可靠的. 2.分离成单个菌体、在培养基中培养成菌斑,涂板、染色、显微镜就可以找到染色体非常清晰的染色菌体!3. 一般设置一个对照 即取一株生长健壮,且已知其革兰氏染色反应的菌株,与待检测的菌株一同染色,染色时间、染液量一致.染色后一同做镜鉴. 一般G+选枯草芽孢杆菌,G-取大肠杆菌 4.

遂溪县18323595908: 有关革兰氏染色法的相关问题.
一哲氯化: 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌.此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应. 步骤...

遂溪县18323595908: 革兰染色的原理是什么? -
一哲氯化:[答案] 1.原理 革兰氏染色的原理尚未完全阐明.目前主要有细菌等电点\化学结构及细胞膜通透性等三种学说: (1)革兰氏阳性菌等电点在PH2~3,比阴性菌(PH4~5)为低.因此阳性菌和碱性染料的结合力比阴性菌强. (2)革兰氏阳性菌含有核糖核酸镁盐...

遂溪县18323595908: 革兰氏染色法的问题1、现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌,请你鉴定其革兰氏染色反应?你怎样运用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为对照菌株... -
一哲氯化:[答案] 我只会回答第二个: 菌龄太老的话,细胞壁通透性变差,阳性菌也会被染成红色. 第三个后半问: 乙醇脱色后,阳性细菌和阴性细菌都是蓝色.

遂溪县18323595908: 革兰氏染色法 -
一哲氯化: 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立 细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做...

遂溪县18323595908: 革兰氏染色的关键步骤是什么 -
一哲氯化:[答案] 革兰氏染色四大基本步骤: 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 沙黄复染 其中乙醇脱色是关键 因为如果脱色过度,有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性 如果脱色不够,有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性

遂溪县18323595908: 求几道关于革兰氏染色法的生物体答案,1.影响革兰氏染色结果正确性的因素有哪些?染色中最关键的环节是什么?2.革兰氏染色的菌龄为什么不能太老》用... -
一哲氯化:[答案] 1.影响因素太多了,菌龄、涂片厚薄均匀度、媒染时间、乙醇脱色程度等都是.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色.如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌.脱色...

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