cDNA文库的筛选鉴定
提取基因工程的目的基因。基因保存。
1 核酸杂交
是最常用,最可靠的方法之一.可大规模地分析文库的克隆子.
1)同源探针:至少含有所需cDNA克隆的一部分确切序列.常用于以一个部分克隆分离cDNA文库中的全长克隆.
2)部分同源探针:探针的序列与所要筛选的cDNA克隆的序列相关但不相同.常用于克隆家族基因.
3)总cDNA探针:
通过反转录酶均匀掺入放射性核苷酸或通过总的或分级分离得到的poly(A)+mRNA进行末端标记而获得cDNA探针.
cDNA扣除探针:
从第一种mRNA制备cDNA探 针, 连续多次与20倍过量的第二种mRNA杂交;
回收未杂交的cDNA探针, 再与100倍过量的第一种mRNA杂交, 使得原mRNA中的一些特异序列得到高度富集.
* 主要用于探测cDNA文库中与调节水平有所差别的mRNA克隆.
5)合成寡核苷酸探针
2 特异性免疫学检测
在cDNA表达文库中,目的基因的表达产 物能与特异性抗体发生免疫学反应,通过酶学的方法加以检测
3 cDNA克隆的同胞检测
将cDNA文库分成若干组含有10-100个克隆子的易于处理的亚cDNA文库,对每组亚cDNA文库进行检测,当鉴定出阳性库后再不断将其分成更细的库进行检测,直到获得阳性单克隆.
4 cDNA克隆的确证
cDNA克隆含有编码某一特定蛋白质的完整氨基酸序列的开放读框.
第四节 目的基因的分离
外源基因:
插入到载体内的那个特定的片段基因.
目的基因:
那些已被或者准备要分离,改造,扩增或表达的特定基因或DNA片段.
从基因文库中提取目的基因
基因文库是将目标生物的DNA或者片段整合到载体上，然后将载体导入到某些特定细菌中保留。在提取基因时，用所知道的部分目的基因序列做扩增制备探针，或者用已知基因编码的蛋白质制作成相应抗体做探针。筛选出相应的目的基因。
比较分析基因组DNA文库和cDNA文库。
③基因组文库中的编码基因包括内含子和外显子;而cDNA克隆的基因不含内含子。(3)应用范围不同 ①基因组DNA文库可用于分离特定的基因片断、分析特定基因结构、研究基因表达调控，还可用于全基因组物理图谱的构建和全基因组序列测定。②cDNA文库可用于筛选目的基因、大规模测序、基因芯片杂交等功能基因组学...
高中生物DNA探针含义是什么?运行原理?
1. DNA探针是一种核酸探针，通常由特异的DNA片段制成，长度可达数百至数千碱基对。2. DNA探针可以来源于细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞，它们通常是特定基因的全部或部分序列。3. 为了获得特异性，DNA探针需要通过分子克隆技术制备，这包括构建基因组DNA文库并筛选出与目标序列互补的克隆。4. ...
DNA文库一般分几种
分为cDNA文库和DNA文库。从供体细胞获得的DNA是DNA文库。通过细胞mRNA逆转录获得的DNA是DNA文库，比CDNA文库大。
重组DNA技术中可用于获取目的基因的方法有( )。
【答案】：A、B 应用重组DNA技术有时是为了分离、获得某一感兴趣的基因或DNA序列，这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因。AB两项，获取目的基因的方法包括：①化学合成，即通过DNA合成仪合成目的基因。②基因组DNA文库筛选，即利用限制性内切核酸酶切割染色体获取基因。③cDNA文库法，即以mRNA为模板合...
用什么方法从基因文库中获得目的基因
基因工程流程的第一步就是获得目的DNA片段,如何获得目的DNA片段就成为基因工程的关键问题.所需目的基因的来源,不外乎是分离自然存在的基因或人工合成基因.常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选 直接获取 1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的...
cdna文库和基因组dna文库的区别
cdna文库和基因组DNA文库在多个方面有着显著的区别。首先，它们的来源不同。cdna（circular DNA）是通过逆转录过程形成的，以mRNA为模板，这是一种特殊的DNA形式，其序列与mRNA互补，不存在基因组中的内含子。相比之下，基因组DNA是指整个生物体的DNA，涵盖了所有基因信息，包括编码区和非编码区，存在于...
植物基因工程的内容(基因克隆方法、连接、转化、筛选及鉴定)
1）目的基因制备和分离：一般通过文库筛选、同源序列比对等方法进行克隆。2）DNA重组载体的构建：选择植物表达载体，根据载体选择或添加酶切位点，然后进行酶切连接，构建重组载体。3）转化：转化方法有多种：农杆菌法：将重组载体用电击或热激的方法将其转入农杆菌中，再用农杆菌侵染植物；基因枪法：将...
基因文库制备是什么意思
基因文库制备在生物技术和医学研究领域具有广泛应用。它可以被用于基因诊断、药物筛选、创新药物开发和疾病治疗等方面。例如，基因文库制备可以帮助科学家们鉴定某种病原体的基因编码，从而研发出相应的治疗手段。此外，基因文库制备也可以用于探究复杂疾病的发病机制，为疾病的早期诊断和治疗提供基础支持。
DNA文库的用途
由于cDNA文库包含了该生物所有的可表达基因片段，因此可随时筛选出需要的目的基因片段。不必再通过PCR制备，可以节省时间和成本，提高效率。cDNA文库与基因组文库的区别： 途径不同：cDNA文库是经mRNA反转录cDNA获得的；基因组文库是将完整的DNA经限制性内切酶切割得到的。 内容不同：cDNA文库只含有部分...
比急乌拉： 1 核酸杂交 是最常用,最可靠的方法之一.可大规模地分析文库的克隆子.1)同源探针:至少含有所需cDNA克隆的一部分确切序列.常用于以一个部分克隆分离cDNA文库中的全长克隆.2)部分同源探针:探针的序列与所要筛选的cDNA克隆的序列...
房县19487966748： 如何从cDNA文库中筛选基因 - ？
比急乌拉： 采用PCR技术
房县19487966748： 如何鉴定cDNA文库是否构建成功?通常都是用什么方法鉴定的? - ？
比急乌拉： 1 直接筛选: 1 利用抗性基因标记 2 营养标记 3 阿拉法半乳糖苷酶标记(插入突变)2 菌落原位杂交杂交(质粒文库)/噬菌斑原位杂交(噬菌体文库),然后用southern杂交检测阳性的位点3 对于表达文库的鉴定,可以通过1表形分析,2利用免疫学探针,3 产物生物功能来判断
房县19487966748： 怎样做好cDNA表达文库的成功筛选? - ？
比急乌拉： 表达文库应该用,噬菌体展示技术吧,用能互作蛋白质或抗体吧
房县19487966748： 反转录法获得目的基因的过程? - ？
比急乌拉：[答案] 1.mRNA的纯化 2.cDNA第一链的合成 3.cDNA第二链的合成 4.cDNA克隆 5.将重组体导入宿主细胞 6.cDNA文库的鉴定 7.目的cDNA克隆的分离和鉴定 大概就这7个过程把.
房县19487966748： 从RNA抽提到制成cDNA的全过程 - ？
比急乌拉： 一).构建cDNA文库: 以生物细胞的总 mRNA 为模板,用反转录酶合成互补的双链 cDNA ,然后接到载体上,转入到宿主后建立的基因文库就是 cDNA 文库.1、mRNA的提取及其完整性的确定 1) 总 RNA 的提取 RNA 提取方法:APGC法或...
房县19487966748： cDNA文库必须满足什么条件?其构建包括哪些步骤? - ？
比急乌拉： 条件:1 、要使用mRNA经过反转录PCR产生cDNA.2 、要进一步获得cDNA全长3 、加适当接头,连接到适当的载体内.4 、转化受体细胞,构建为cDNA文库. 基本步骤包括:RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚...
房县19487966748： 什么是 cdna文库?同基因组文库有何差别 - ？
比急乌拉： (1)cDNA文库是指细胞全部mRNA通过逆转录得到cDNA后被克隆的总和.cDNA的组成特点是片段中不含基因的内含子和其他调控序列.cDNA文库构建基本步骤:①制备mRNA:全RNA提取与mRNA的分离提纯;②合成cDNA:oligo dT与mRNA3...
房县19487966748： cDNA文库构建的方法与过程分别是什么? - ？
比急乌拉：[答案] cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合.经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头,连接...
房县19487966748： 如何获得cDNA?需要哪些步骤? - ？
比急乌拉： 以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA. 步骤的话应该与DNA复制过程类似,需要的原料是mRNA模板,四中脱氧核糖核苷酸,逆转录酶,还有能量,注意:这样获得的DNA片段不含非编码区序列.以下是专业回答一).构建...
